PCR技術(shù)的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點：
成本高；
設(shè)計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
二丁基二硅烷(>90.0%(GC))2-氟酚

二二戊基硅烷(>90.0%(GC))-氟

二二己基硅烷(>90.0%(GC))1,2,三氟

己基二硅烷(>95.0%(GC))溴-2-氟

二(甲基)十八烷基硅烷(>94.0%(GC))2,二氟酚

二(甲基)正辛基硅烷(>97.0%(GC))5-氟-2-

二(甲基)基硅烷(>98.0%(GC))2,4,5-三氟

1,1,2,2-四-1,2-二甲基二硅烷(>98.0%(T))2,二溴酸酯

2,1,并噻二唑(>99.0%(GC))2--甲基吡啶

9,9-雙(氨基基)芴(>98.0%(T))-2-甲基吡啶

4,4'-聯(lián)二酸(>95.0%(T))吡咯并嘧啶

溴三(>97.0%(GC))溴基

9,9-雙(氨基)芴(升華提純)(>99.0%(GC)(T))3,二基芐氧基三氟化物

雙(甲酰基)(升華精制品)(>95.0%(GC))間三氟

溴-4'-(二氨基)聯(lián)(>93.0%(GC))3,二氟

4'-溴-聯(lián)酸(含有數(shù)量不等的酸酐)溴-吡啶

溴-4',4''-二甲基三(>95.0%(GC))氟茴香硫

4,4'-雙(5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜-2-基)聯(lián)(>98.0%(GC)(T))5-溴嘧啶-2-羧酸
人鼻病毒16探針法熒光PCR檢測試劑盒癌易感基因1抗體IGF-I/FITC  熒光素標記標記胰島素樣生長因子-I抗體IgG100 ul

Bcl-2同源拮抗劑抗體IGF-II/FITC   熒光素標記胰島素樣生長因子-II抗體IgG100 ul

β3腎上腺素能受體抗體IGF-IIBP3/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體IgG100 ul

腦鈉素/利鈉肽抗體IGF-1 R/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子-I受體抗體IgG100 ul

BZW2蛋白抗體IGF-1R/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子-I受體抗體IgG100 ul

緩激肽B1受體抗體phospho-IGF1 Receptor (Tyr1161) /FITC  熒光素標記酸化胰島素樣生長因子1受體抗體IgG100 ul

鈣激活通道蛋白α1抗體IGFBP-1/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1抗體IgG20 ul

卵黃狀黃斑病蛋白2抗體IGFBP-2/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2抗體IgG100 ul

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SAD-B抗體IGFBP-3/FITC  熒光素標記胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3抗體IgG100 ul